1.获取目的基因
(1)通过基因文库获取目的基因:
①基因文库的含义:将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片段,分别与载体连接起来,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。这个受体菌群体就被称为基因文库。
②种类:
a.基因组文库:含有一种生物所有的基因。
b.部分基因文库:含有一种生物的一部分基因。
(2)利用PCR技术扩增目的基因:
①原理:DNA分子半保留复制。
②场所:生物体外(PCR仪)。
③优点:操作简单、容易掌握、结果可靠、能在较短时间内大量扩增。
④发明家:美国科学家穆里斯。
(3)通过化学方法直接人工合成目的基因:
①仪器:DNA合成仪。
②基因特点:比较小、脱氧核苷酸序列已知。
2.构建基因表达载体
(1)目的:使目的基因进入受体细胞并有效表达,能稳定存在且遗传给后代。
(2)组成:一个基因表达载体除了目的基因外,还应包括启动子、终止子和标记基因等。